安徽省疾病預防控制中心毒理科病媒生物檢測實驗

　　背景：鼠類不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴重危害人類健康;而且通過嚙咬、盜食、污染等方式給工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟損失。在此背景下，通過深入細致的調研工作，了解鼠類防制技術規(guī)范的現(xiàn)狀，并在遵循相關國家、行業(yè)標準的基礎上，編制符合深圳市特點的鼠類防制技術規(guī)范，有助于安全、有效地預防和控制鼠類，保護人民群眾身體健康和生命安全，提升安徽省的環(huán)境衛(wèi)生水平。

　　一、材料和方法：

　　樣品來源于居民區(qū)及收治醫(yī)院周圍環(huán)境采集目標病媒生物。160份鼠肺樣品來自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來自安徽等地。所有樣品均凍存于-80度待檢。

　　二、儀器及試劑：

　　1、凈信全自動樣品冷凍研磨儀

　　2、熒光定量PCR分析儀

　　3、高效病毒濃縮試劑盒

　　4、巢式RT-PCR所采用的引物,一步法RT-PCR試劑盒

　　5、RNA提取試劑盒

　　三、

　　1、樣品RNA的提取別取待檢鼠肺組織于全自動樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負20度保存?zhèn)溆茫泱贵w表擦拭子中加入無菌生理鹽水少許于4度中過夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體10000r/min離心5min，其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負20度保存?zhèn)溆?，按照試劑盒的說明從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA于負20度中保存?zhèn)溆谩?/p>

　　樣品研磨前后效果圖

　　實驗步驟：

　　1、準備全自動樣品冷凍研磨儀。

　　2、金屬適配器，以及鋼珠適配器。

　　3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠。

　　4、將適配器裝入凈信研磨儀中，開啟低溫功能保持溫度。

　　5、設定參數(shù)，啟動儀器至研磨程序結束，可得到如圖所示樣品。

　　儀器介紹：

　　全自動樣品冷凍研磨儀：一種快速、高效、制冷的研磨系統(tǒng)。它能在非常短的時間內(nèi)將土壤、植物和動物的組織/器官、細菌、酵母、真菌、孢子、古生物標本等樣品完成研磨、粉碎、混合機細胞破壁。廣泛應用于生命科學、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質檢、材料等領域。

　　優(yōu)勢：

　　研磨效果具有高度可重現(xiàn)性

　　觸屏操作，可存儲10條參數(shù)

　　能夠有效抑制核酸降解，保留蛋白質活性

　　研磨時處于全封閉狀態(tài)，無交叉污染，低噪音

　　可輕松處理高韌塑料、高強塑料、樹脂等難研磨樣品

　　具備安全罩及安全鎖，無需涉及液氮操作，安全性高

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